MR评价酪氨酸酶基因在人胚胎肾293细胞表达的实验研究

• 作者: 元建鹏 张卫东 张琳 梁碧玲 谢榜昆 钟镜联
• 来源期刊: 中华放射学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 磁共振成像 细胞学技术
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 605-610
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1005-1201.2004.06.011

摘要

目的以酪氨酸酶基因作为报告基因转染人胚胎肾(HEK)293细胞,利用其合成大量黑色素而能被MRI检测的特性来反映基因表达的情况,以探索MRI评价体外细胞基因表达的方法.方法以脂质体将含酪氨酸酶基因完全cDNA的pcDNA3tyr质粒转染到HEK293细胞,以MR T1 W、T1 W/SPIR(selective partial inversion recovery)、T2 W序列扫描转染细胞,观察表达的黑色素的MR信号.应用Fontana染色和电子显微镜检测黑色素的合成,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测酪氨酸酶基因的cDNA片段,以进一步验证酪氨酸酶基因的转染与表达.结果(1)pcDNA3tyr质粒转染进入HEK293细胞并在其中表达生成黑色素,转染5、10、20μg质粒的106个细胞内生成的黑色素能够被MRI检测到并在MR T1WI、T1WI/SPIR、T2WI呈高信号,转染质粒量越大,MRI信号强度越高.6.25×104个转染有20μg质粒的HEK293细胞仍可检测到高信号.(2)Fontana染色法检测到HEK293细胞内的黑色素颗粒;(3)电子显微镜观察到在HEK293细胞胞质内有较多的黑色素颗粒及黑色素前体;(4)采用RT-PCR方法检测到转染的HEK293细胞含酪氨酸酶基因的cDNA片段.结论MRI能够检测到HEK293细胞内由外源基因表达合成的黑色素,说明影像学与分子生物学技术结合可以评价体外细胞基因表达的情况,随着技术的进一步发展,影像学在基因治疗的评价中将可以发挥重要的作用.