特异性抗SSA/Ro噬菌体抗体的制备及其基因序列分析

• 作者: 张奉春 彭劲民 李娅杰
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 自身抗体 噬菌体 SSA/Ro抗原 单克隆抗体 基因序列
• 年，卷（期）: 2004,（22）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 1904-1908
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4189字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2004.22.016

摘要

目的由已构建的人源单链可变区噬菌体抗体库中制备出抗SSA/Ro单克隆抗体,并对这些抗体的基因序列进行分析.方法将冻存的抗体库菌种复苏制备噬菌体抗体库.用PCR、基因序列分析及酶切的方法对其进行鉴定.以组织培养皿法对该噬菌体抗体库进行富集筛选,用ELISA方法对富集后次级抗体库进行鉴定.制备单克隆抗体并鉴定其特异性,对单克隆抗体的可变区基因序列进行测序分析.结果所制备的噬菌体抗体库的滴度为1.6×1012 cfu/ml,外源基因的插入重组率为80%,插入片断为人抗体可变区基因,且该抗体库具有良好的多样性.富集筛选回收的噬菌体数逐渐增加,富集后的抗SSA/Ro噬菌体抗体次级库吸光度(A)值为富集前的2.8倍,且该次级库有良好的抗SSA/Ro特异性.经富集制备出5个特异性抗SSA/Ro单克隆抗体,这些单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与VH1、VH3、VH4、Vκ1、Vκ2、Vκ3基因家族有高度同源性.结论本实验室构建的scFv噬菌体抗体库可以用于特异性抗体的筛选及单克隆抗体的制备.制备出的抗SSA/Ro单克隆抗体可变区基因序列与人胚系基因比较有突变,为研究相关疾病的发病机理开创了新的途径.