摘要:
目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血干细胞(PBSC)悬液中单核细胞和造血干/祖细胞分别诱导培养的树突状细胞(DC)的特性,探讨临床应用PBSC悬液诱导DC的前景.方法健康供者经G-CSF动员后采集PBSC,分两种方法诱导培养树突状细胞:①贴壁细胞(单核细胞)经粒-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)+白细胞介素-4(IL-4)培养2周,培养结束前48、24 h分别加入肿瘤坏死因子(TNF-α)、布雷菲德菌素( brefeldin A,BFA );②非贴壁细胞( 含CD34+细胞 ),加入Flt3Ligand(FL)+干细胞因子(SCF)+GM-CSF+IL-4培养1周,再按前一种方法继续培养2周.培养结束后,流式细胞仪分析细胞表型和胞质(c)IL-10+(PE标记)、cIL-12(P40)+(TC标记)细胞.结果新鲜标本含CD14+细胞(18.4±8.6)%,CD34+细胞(0.9±0.4)%.以PBSC悬液中的2×106单个核细胞为起始细胞,前一种培养方法获得(1.6±0.6)×105细胞,细胞表型:CD11c+(97.3±5.2)%,CD86+(88.2±6.8)%,CD83+(59.6±8.4)%,HLA-DR+(96.5±7.1)%,CD1a+(36.6±7.5)%,cIL-12(P40)+(15.9±5.1)%,cIL-10+(1.2±0.4)%;后一种培养方法获得(1.2±0.4)×106细胞,细胞表型:CD11c+(91.4±6.4)%,CD86+(76.8±6.9)%,CD83+(47.3±9.3)%,HLA-DR+(65.3±11.3)%,CD1a+(48.2±5.9)%,cIL-12(P40)+(14.8±4.2)%,cIL-10+(1.4±0.5)%.结论 G-CSF动员的PBSC悬液含有丰富造血干/祖细胞和单核细胞,以适当培养条件对这两种细胞分别诱导,均能够培养出成熟的激活的能够分泌IL-12(P40)的DC;对造血干/祖细胞先行扩增再诱导分化的培养方法能够获得更多的DC.在患者需要大量自身DC用于治疗用途时,G-CSF动员的PBSC悬液是很好的诱导培养DC的材料.