植物NAD-IDH基因克隆及体外表达酶活力分析

• 作者: 陈喜文 陈德富
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶 体外表达 小麦胚芽无细胞蛋白质合成系统 二硫键异构酶 甘蓝型油菜
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 159-166
• 页数: 8页
• 分类号: Q94
• 字数: 8918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2004.02.010

摘要

植物NAD+-依赖型异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)是一多功能酶. 以拟南芥生态型"Columbia gl1"及甘蓝型油菜三系"陕2A", "陕2B"和"垦C1"的叶片为材料, 采用RT-PCR方法成功地从每种植物材料中分别克隆了3种NAD-IDH不同亚基基因. 同源性搜索发现, 来源于油菜的克隆基因是新基因. 将克隆基因的功能蛋白编码区整合到pMID1多克隆位点, 构建表达重组体, 均能在体外翻译系统中高效地表达出特异目的蛋白. 亚基0, 亚基1和亚基2基因转录本加入到含终浓度为36 μg/mL的二硫键异构酶的体外翻译系统, 体外表达产物中检测到NAD-IDH酶活力. 不同基因种类及转录本分子比的体外表达产物的酶比活力比较表明, NAD-IDH由3种亚基组成, 缺一不可, 缺少亚基0是致命的, 缺少亚基1或2中的任何一个对酶活力的损伤是严重的. 同时发现, 来源于陕2A和陕2B的亚基1基因转录本中存在碱基缺失现象, 从而发生移框突变或无义突变, 使突变亚基不表现正常亚基1功能, 导致油菜品系间叶片NAD-IDH酶比活力存在差异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈德富	南开大学生物化学与分子生物学系	57	708	14.0	25.0
2	陈喜文	南开大学生物化学与分子生物学系	52	581	12.0	22.0