血管性血友病因子裂解酶金属蛋白酶域的克隆和表达

• 作者: 傅建新 白霞 阮长耿 高维强
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: von Willebrand因子 克隆,基因 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1832-1836
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 3188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2004.10.021

摘要

目的:克隆和表达血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)的金属蛋白酶域.方法: 应用PCR从含有人vWF-cp金属蛋白酶域的质粒中扩增出该区域,克隆至pUC18载体后行序列分析,并将其重组于带有6×His Tag的融合蛋白表达载体pET28a(+)中,在大肠杆菌DE3/plySs中诱导表达.融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,采用Western blot印迹鉴定.结果: PCR扩增得到658bp的vWF-cp金属蛋白酶域的基因片段,测序结果与GenBank序列一致.重组表达质粒经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导5 h后表达的融合蛋白占菌体总蛋白的28%,进一步纯化后其纯度在95%以上.结论: 在大肠杆菌中高效表达了人vWF-cp的金属蛋白酶结构域,为深入研究vWF-cp结构与功能的关系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮长耿	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	188	746	13.0	17.0
2	高维强	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	19	48	4.0	5.0
3	白霞	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	58	167	6.0	8.0
4	傅建新	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	30	157	7.0	11.0