人神经生长因子的A-T克隆及在Pichia Pastoris酵母中的表达

• 作者: 任常山 舒红
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: β-神经生长因子 PCR A-T克隆 Pichia pastons 表达
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: R392.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2004.11.006

摘要

目的对人含前导肽的β-NGF基因序列进行体外扩增、克隆及分析鉴定,并将其插入Pichiapastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中进行表达及鉴定.方法采用PCR技术,从人胎盘DNA基因组中扩增出含前导及信号肰的β-NGF基因序列;用A-r克隆法,与pGEM-T载体连接,经筛选得到重组质粒pGEM-Tβ-NGF,用酶切、PCR法及序列分析进行鉴定;将β-NGF插入酵母表达载体pPIC9K,用脂质体法导入CS115中,甲醇诱导分泌蛋白.结果亚克隆中,1.2%的琼脂糖凝胶电泳显示在748bp位置出现阳性条带;发酵液中蛋白SIS-PAGE电泳在14.OKD附近有特异表达带;蛋白表达量占菌体蛋白的30%;Westernblotting检测表明此带有特异活性.结论重组质粒pGEM-Tβ-NGF蛋白产量高,具有免疫活性.