摘要:
目的:了解脑红蛋白在正常大鼠脑中的分布以及缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic damage,HID)的表达,防治脑缺氧性损伤提供新思路.方法:①wistar大鼠,灌以40 g/L多聚甲醛-磷酸缓冲液,取脑于40 g/L多聚甲醛中4℃下固定,分子生物学常规方法液体细菌培养、提取纯化质粒、脑红蛋白质粒线性化、脑红蛋白cRNA探针标记,原位杂交组织化学方法检测脑红蛋白mRNA在正常大鼠脑中的分布.②Wistar大鼠,随机分为6组,其中5组制备脑缺氧缺血模型,分别在血流阻断1,5,15,30,60 min断头取大脑,对照组为假手术组.设计脑红蛋白mRNA基因引物,提取脑组织总RNA,反转录合成单链cDNA,进行PCR反应后分析结果.Stata统计软件包oneway单因素方差分析进行数据处理.结果:①脑红蛋白mRNA阳性细胞在正常大鼠脑中定位于神经元中,分布广泛;扣带皮质,梨状皮质中的阳性细胞密集,阳性产物集中于细胞质;海马各区均有脑红蛋白mRNA阳性神经元分布;前脑核团中,杏仁中央核、杏仁内侧核、杏仁皮质前核、杏仁皮质后核、梨状内核均见脑红蛋白mRNA阳性神经元的分布,丘脑中脑红蛋白mRNA阳性神经元散在分布;小脑脑红蛋白mRNA阳性产物主要分布于蒲肯野细胞.②大鼠脑组织缺氧缺血时脑红蛋白mRNA表达呈现时间相的变化:缺血1 mim时,脑红蛋白mRNA快速增加达高峰A=1.127,t=2.130,(P<0.01),5 min仍然保持在高水平(A=1.119),15 min时迅速降低(A=0.627,t=1.401,P>0.05).以后又见缓慢升高.结论:脑红蛋白基因在脑内有广泛的分布,其蛋白质及mRNA主要定位于神经元的细胞质,不同脑区的脑红蛋白mRNA阳性细胞的密度不同.随着脑缺氧缺血时间不同,脑红蛋白mRNA的表达呈现时相性的变化,即脑红蛋白mRNA的表达在脑缺氧缺血后增强,提示脑红蛋白可能在脑缺氧的适应性调节过程中起重要作用.