老年神经变性疾病蛋白基因研究:3种α-突触核蛋白提取纯化方法的比较

• 作者: 李淑婷 陈彪
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经变性疾病 突触蛋白类 方法 基因
• 年，卷（期）: 2004,（25）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5294-5296
• 页数: 3页
• 分类号: R745.1
• 字数: 3639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2004.25.073

摘要

目的:用经济、简便、快捷的方法得到大量、高纯度的α-突触核蛋白.方法:将重组的proEXNACP,pGEXNACPH和pTYBNACP质粒分别转入大肠杆菌DH5α,BL21和ER2566细胞进行培养增菌,IPTG诱导产生α-突触核蛋白;超声破碎、离心粗提取得到融合的α-突触核蛋白;分别经Ni-NTA resin,Glutathione Sepharose 4B和Chitin Beads纯化,得到α-突触核蛋白.用SDS-PAGE电泳观察纯度、Western杂交检测正确性、用BCA蛋白定量法测定蛋白含量.结果:3种方法均能得到较高纯度的α-突触核蛋白,其中用Ni-NTA resin提取纯化的α-突触核蛋白的纯度最高;蛋白收获量分别是10 mg/L,5 mg/L和5 mg/L;经济耗费和实验的繁简程度没有较大差异.结论:3种方法均可作为α-突触核蛋白的提取方法.