兔肌源性干细胞的分离及诱导分化为成骨细胞的观察

• 作者: 张年春 杨志焕 邓志龙
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 于细胞 细胞培养 肌炎,骨化性
• 年，卷（期）: 2004,（17）
• 所属期刊栏目: 干细胞生物学特征相关基础研究
• 页码范围: 3258-3260
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 5509字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2004.17.025

摘要

目的:探讨兔肌源性干细胞的分离、鉴定和诱导分化的方法.方法:取2月龄幼兔臀肌1 g,采用胶原酶,dispase,胰蛋白酶分步消化,针头过滤,差速贴壁法分离肌源性细胞.用锥虫蓝染色细胞计数描记生长曲线,MTF法间接反映细胞增殖活性.作Bcl-2,Desmin免疫细胞化学染色鉴定肌源性细胞.用分化培养基(DMEM+5 mL/L FBS+50 mL/LHS+10 mg/L BMP2+5 g/L维生素C+10 mmol/L β-甘油磷酸钠+10mg/L地塞米松+10g/L青霉素/链霉素)诱导细胞分化,用Osteocalcin,碱性磷酸酶,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色鉴定成骨前体细胞.结果:用上述方法分离的肌源性细胞呈短梭形或多角形,体积明显小于肌细胞,24 h贴壁,接种后36 h开始增殖,生长有明显的方向性,原代肌源性干细胞对数生长期为7～9 d,16 d汇合.第3代肌源性干细胞接种后第3～5天为对数生长期,约8 d汇合.细胞汇合后少部分细胞出现双核或三核,甚至出现核链,显示肌细胞分化倾向.约60%～70%的原代肌源性干细胞Bcl-2,Desmin免疫细胞化学染色呈阳性.用成骨细胞分化培养基中培养2周后,大部分细胞Osteocalcin,碱性磷酸酶,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色呈阳性,显示其成骨前体细胞分化.结论:用上述方法分离的肌源性细胞具有干细胞特征,并能在体外分化为成骨前体细胞和肌起源细胞,是一种组织特异性干细胞,即肌源性干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张年春	解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	2	6	1.0	2.0
2	杨志焕	解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	3	9	2.0	3.0
3	邓志龙	解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室	1	6	1.0	1.0