内源性胰岛素替代疗法中葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体的构建

• 作者: 兰丽珍 方芳 蹇锐 邓华聪 郑宏庭
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖激酶 基因 逆转录病毒样 细胞移植 糖尿病/治疗
• 年，卷（期）: 2004,（24）
• 所属期刊栏目: 糖尿病康复相关基础研究
• 页码范围: 5158-5159
• 页数: 3页
• 分类号: R587.1
• 字数: 1899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2004.24.053

摘要

背景:由于胰岛细胞分离技术难度较大,目前糖尿病细胞移植治疗尚缺乏理想的细胞来源.目的:构建葡萄糖激酶(Glucokinase,GK)基因逆转录病毒表达载体及稳定的产毒细胞系,为构建具有葡萄糖反应性胰岛素分泌能力的胰岛代理细胞打下基础,可望为糖尿病提供一种更符合生理要求的内源性胰岛素替代疗法.设计:非随机非对照的实验研究.地点、材料和干预:本研究在解放军第三军医大学附属新桥医院中心实验室进行.将GK质粒(pCMV4-GKZ1)经EcoR1/BamH1双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体PLXSN,构建逆转录病毒表达载体PLX-GK,用酶切法和测序法对重组体进行鉴定.然后脂质体介导逆转录病毒表达载体PLX-GK转入包装细胞PA317,筛选病毒滴度较高的稳定产毒细胞系,PCR鉴定.主要观察指标:①重组逆转录病毒载体构建与鉴定结果.②病毒滴度鉴定及PCR结果.结果:成功构建GK基因逆转录病毒表达载体,经酶切及测序证明目的基因插入位点和读码框架正确、无突变;产毒细胞系的平均病毒滴度为6.8×108 CFU/L,筛选出一株病毒滴度为1.8 ×109CFU/L稳定产毒细胞系PA317/GK,PCR证实GK基因整合入细胞基因组.结论:成功构建了携GK基因的逆转录病毒表达载体及高滴度的产毒细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰丽珍	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	25	106	5.0	9.0
2	邓华聪	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	197	1595	19.0	31.0
3	郑宏庭	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	20	95	5.0	9.0
4	方芳	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	29	155	8.0	12.0
5	蹇锐	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	4	4	1.0	1.0