应用超高灵敏度荧光显微成像及共聚焦显微成像观察光敏剂细胞内分布的对比研究

• 作者: 刘凡光 戴维德 曾晶 李家泽 李晓松 王雷 顾瑛
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 血卟啉类 甲醚类 光敏感药
• 年，卷（期）: 2004,（14）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2771-2773
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 4070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2004.14.049

摘要

背景:光敏剂亚细胞分布研究多采用激光共聚焦显微镜来开展.激光共聚焦显微成像系统能够获得细节清晰的细胞断层荧光图像,可以进行精确的光敏剂亚细胞定位.但其样品准备过程复杂,费用不菲,而且对于荧光效率较低的光敏剂探测难度很大.目的:应用带像增强器的冷电感耦合装置(intensified charge-coupled device,ICCD)的超高灵敏度荧光显微成像系统及共聚焦显微成像进行光敏剂细胞内分布的对比研究,深入探讨光动力疗法的损伤机制,为拓展其在临床康复治疗领域的适应证奠定实验基础.设计:非随机非对照的实验研究.地点、材料和干预:实验地点为北京理工大学光电工程系实验室.传代培养内皮细胞、食管癌细胞和肺癌细胞,将不同浓度血卟啉单甲醚(hematoporphrin monomethyl ether,HMME)与细胞共同孵育不同时间.采用荧光显微镜及ICCD组成的荧光显微成像系统采集不同浓度及不同孵育时间条件下HMME的荧光图像,并采用计算机图像处理技术进行图像增强、滤波后计算其细胞浆与细胞核的平均荧光强度比值.同时应用激光共聚焦显微镜图像采集进行对比.主要观察指标:不同荧光显微成像系统采集到的细胞的光敏剂荧光图像的细节特点及胞浆与胞核区域光强比值的对比观察.结果:HMME浓度为5 mg/L时,荧光显微镜采集到HMME的荧光图像;HMME浓度升高到160 mg/L,激光共聚焦显微镜获得HMME的荧光图像.两组图像的特点都为胞浆中荧光强度较高,细胞核区荧光较弱;细胞浆与细胞核的比值约为2～3:1.结论:荧光显微镜和ICCD采集细胞内光敏剂的荧光图像灵敏度高,方法可靠、实用,可用来对荧光效率较低的光敏剂进行细胞内分布研究.HMME较多分布在细胞质中,细胞核吸收较少.从而得出HMME介导的内皮细胞及肺癌细胞光动力损伤的初次损伤位点可能是细胞浆内多种细胞器.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李家泽	北京理工大学光电工程系	53	559	12.0	19.0
2	顾瑛	解放军总医院激光医学科	178	1551	18.0	30.0
3	刘凡光	解放军总医院激光医学科	105	1266	17.0	30.0
4	曾晶	解放军总医院激光医学科	65	407	11.0	16.0
5	戴维德	解放军总医院激光医学科	16	183	9.0	13.0
6	王雷	北京理工大学光电工程系	10	174	7.0	10.0
7	李晓松	解放军总医院激光医学科	37	232	9.0	14.0