以重组TACE胞外功能域从噬菌体随机肽库中筛选TACE的抑制肽

• 作者: 张慧 李凌波 杨渝珍 韩玲 黄巍
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子转换酶 胞外功能域 噬菌体展示 抑制肽
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 30-35
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5852字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.01.006

摘要

肿瘤坏死因子转换酶(TACE)是加工裂解TNF-α前体的关键酶,参与了许多炎症的发生发展过程.为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽,首先制备筛选靶分子,用RT-PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区(T800)和整个胞外区(T1300),然后分别克隆至pET-28a和pET-28c中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,两者均为包涵体,变性复性后过Ni2+-NTA亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白.以纯化的重组T800和T1300分别筛选噬菌体展示随机15肽库,对筛选克隆进行ELISA检测、竞争抑制实验和序列分析.从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列"TRWLVYFSRPYLVAT",固相Fmoc法合成该短肽,观察其在LPS诱导人单核细胞产生sTNF-α中的作用.结果表明,筛选到的短肽可显著抑制TACE的活性,减少TNF-α的分泌,抑制率可达60.3%,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄巍	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	18	51	5.0	6.0
2	杨渝珍	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	36	111	5.0	9.0
3	张慧	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	49	154	7.0	9.0
4	韩玲	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	8	69	4.0	8.0
5	李凌波	华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系	3	3	1.0	1.0