抗人CD19单链抗体基因的构建、表达及功能测定

• 作者: 王建祥 王敏 陈森 饶青
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CD19 单链抗体(ScFv) 原核表达
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 686-691
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.05.002

摘要

采用RT-PCR方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接(splice-ovedap extension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人CD19单链抗体(抗CD19-ScFv)基因.将其克隆至表达载体PET28a并在大肠杆菌中表达.SDS-PAGE和Westem-blot分析结果表明,抗CD19-ScFv在BL21(DE3)菌中获得表达,重组蛋白的相对分子量为27kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的单链抗体片段.流式细胞分析结果证实抗CD19-ScFv可与人类白细胞表面的分化抗原CD19结合,保留了鼠源性单抗与CD19结合活性.抗人CD19-ScFv的构建与表达,为下一步针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王敏		2	16	1.0	2.0
2	王建祥		7	33	4.0	5.0
3	陈森		2	20	2.0	2.0
4	饶青		1	16	1.0	1.0