人端粒酶蛋白催化亚单位基因转染对人胚胎成纤维细胞增殖的影响

• 作者: 杨宗城 梁光萍 罗向东
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒,末端转移酶 成纤维细胞 转染 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-32
• 页数: 3页
• 分类号: R6
• 字数: 1989字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2005.01.011

摘要

目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEF)增殖的影响. 方法体外培养hEF.应用脂质体转染法将pIRES2-增强性绿色荧光蛋白(EGFP)-hTERT正义重组质粒及pIRES2-EGFP空载质粒分别导入hEF中,相应称为hEF-hTERT 和hEF-EGFP.采用蛋白质印迹法(Western blot)检测正常hEF、hEF-hTERT、hEF-EGFP中hTERT蛋白、分化抑制因子Id1、增殖细胞核抗原(PCNA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平.用噻唑蓝(MTT)法测定3种细胞的生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期并计算增殖指数(PI). 结果 (1)Western blot:与hEF-EGFP和hEF比较,hEF-hTERT中的hTERT蛋白、Id1、PCNA和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平均较高.(2)MTT法:细胞接种后第4-6天,hEF-hTERT的吸光度(A)值明显高于hEF和hEF-EGFP(P<0.05),接种后1-6 d hEF与hEF-EGFP的A值比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)细胞周期:与hEF-EGFP和hEF比较,hEF-hTERT G0/G1期细胞较少,S、G2/M期细胞较多;其PI为57.47%,高于hEF-EGFP(13.13%)和hEF(17.38%). 结论外源性hTERT基因转染可使hEF增殖能力增强.