人神经营养素-3基因重组腺病毒载体的构建、表达和生物活性检测

• 作者: 刘然义 吴立志 曾园山 熊轶 王俊梅 王延华 薛刚 黄文林
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 神经营养素-3 基因克隆 重组腺病毒 基因表达 神经干细胞 免疫细胞化学 小鼠
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 460-464
• 页数: 5页
• 分类号: R322.85
• 字数: 4613字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2005.05.002

摘要

目的构建具有生物活性的人神经营养素-3(NT-3)基因重组腺病毒表达载体.方法从人脑组织mRNA中扩增NT-3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒.再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-NT-3).用pAd-NT-3转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-NT-3). 结果NT-3基因RT-PCR扩增产物约801 bp.Adeno-NT-3 PCR鉴定为正确重组子.RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA及Western blot检测显示,Adeno-NT-3能在其转染的293细胞表达和分泌NT-3.这种NT-3能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞. 结论应用体外连接法成功构建了人NT-3基因重组腺病毒表达载体,其表达产物具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞的活性作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王延华	昆明医学院神经研究所	4	17	2.0	4.0
2	刘然义		1	8	1.0	1.0
3	吴立志		1	8	1.0	1.0
4	薛刚		1	8	1.0	1.0
5	黄文林		1	8	1.0	1.0