新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

• 作者: 张富春 杨长庚 薛娜 赵干 马纪
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 准噶尔小胸鳖甲 抗冻蛋白 分泌表达 Western-blot
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 25-27
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 2088字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2005.02.011

摘要

目的:利用酵母Pichia pastoris蛋白表达系统,表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白.方法:根据新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白(MPAFP5)基因序列设计引物,并分别在5'引物和3'引物中引入了EcoRI和SalI酶切位点,经PCR扩增MPAFP5基因成熟肽序列后与pGEX4T-1载体相连,再将MPAFP5从pGEX4T-1载体上切下亚克隆至穿梭质粒pGAPZαA上,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA-MP AFP5,经线性化后采用电转化法将重组穿梭质粒转入酵母细胞SMD1168内,Zeocin+筛选鉴定重组子,小瓶发酵后取上清作SDS-PAGE检测,并用Western-blot检测表达蛋白的正确性.结果:MPAFP5成功地在酵母表达系统获得表达,Western-blot检测表明表达产物为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白.结论:酵母表达系统能够高效表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白,为高密度发酵大量生产抗冻蛋白奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马纪	新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室	80	657	14.0	23.0
2	薛娜	新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室	3	22	2.0	3.0
3	赵干	新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室	9	106	6.0	9.0
4	张富春		3	28	2.0	3.0
5	杨长庚	新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室	3	33	3.0	3.0