奶山羊转基因供核细胞的再饥饿对核移植胚胎发育的影响

• 作者: 刘国辉 刘明刚 张爱民 徐旭俊 成国祥 朱敏 陈娟 陈建泉
• 来源期刊: 实验生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 核移植 饥饿 转基因细胞 胚胎发育 冷冻
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 241-246
• 页数: 6页
• 分类号: Q81
• 字数: 3927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2005.03.009

摘要

为提高转基因奶山羊体细胞核移植胚胎早期发育率,将经转染外源基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿培养(含0.5%FCS的DMEM)5天后分成两部分:第一部分细胞-80℃或液氮冻存,试验前复苏后直接用作供核细胞(试验组Ⅰ),或复苏后恢复培养(含10%FCS的DMEM)2-5天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅱ);第二部分细胞作传代培养(含10%FCS的DMEM)2天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅲ).将上述不同处理的供核细胞进行细胞周期与存活率的检测,并将该供核细胞移入去除遗传物质的山羊MⅡ期卵母细胞的卵周隙内,经电融合、化学激活后,将核移植(NT)胚胎经0.8%琼脂糖包理后移入临时寄母输卵管内,培养6天后回收并观察NT胚胎的早期发育.结果,试验组Ⅱ所用供核细胞中G0/G1期细胞所占比例及其存活率分别为95.68%、99.9%,均显著地高于试验组Ⅰ(88.66%、80%);试验组Ⅱ的桑椹及囊胚期NT胚胎的发育率(66.00%)显著地赣谑匝樽棰?22.00%)与试验组Ⅲ(50.51%).将以上发育的NT胚胎分别移入同步发情的受体后,35天作B超妊娠诊断,试验组Ⅱ的受体妊娠率为45.83%,显著地高于试验组Ⅰ(20.00%)与试验组Ⅲ(29.58%).流式细胞仪分析结果表明,饥饿后的供核细胞经冷冻,复苏后恢复培养2-5天,再经饥饿处理,能显著地提高G0/G1期细胞的比例及细胞存活率;应用该细胞所组建的NT胚不仅具有较高的桑椹与囊胚期发育率,而且具有较高的受体妊娠率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈建泉		36	123	6.0	9.0
5	徐旭俊		8	26	4.0	5.0
6	朱敏		3	25	3.0	3.0
7	刘明刚		2	13	2.0	2.0
8	刘国辉		3	13	2.0	3.0
9	张爱民	同济大学生命科学与技术学院	2	9	1.0	2.0
10	陈娟		3	10	1.0	3.0