丙型肝炎病毒NS5A蛋白对Huh7细胞周期的影响

• 作者: 佘应龙 刘静 叶力 叶林柏 吴正辉 廖庆姣 杨小骏 郑义 郜金荣
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 NS5A蛋白 细胞周期
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 349-352
• 页数: 4页
• 分类号: R373|Q786
• 字数: 2904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2005.05.004

摘要

应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒(HCV)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV 1～3 011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中.通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中.再利用脂质体介导转染Huh7细胞,30h后收获细胞,经Western blot验证,证实HCV的NS5A基因在Huh7细胞中已经获得表达.在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Huh7细胞与pcDNA3.1(-)转染的细胞在转染30h后被收集起来,乙醇固定,PI染色后利用流式细胞仪检测细胞周期变化.G0/G1期由60.6%下降到49.7%,S期由23.9%上升到32.7%,而转染pcDNA3.1(-)细胞的细胞周期与正常的Huh7细胞则差别不大.从而证明HCV NS5A蛋白对Huh7细胞周期具有调节作用.