里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达

• 作者: 余少文 刘刚 张煜 汤新 邢苗
• 来源期刊: 菌物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤维素酶 整合表达 液质联用 羧甲基纤维素
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 367-375
• 页数: 9页
• 分类号: Q939.97
• 字数: 4587字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-6472.2005.03.011

摘要

本工作采用巴氏毕赤酵母Pichia pastoris表达系统进行了里氏木霉Trichoderma reesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseⅡ)的表达.用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2.通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P. pastoris CBHⅡl.在甲醇诱导的条件下培养P.pastoris CBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastoris CBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉.对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余少文	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	41	398	10.0	18.0
2	刘刚	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	36	341	10.0	17.0
3	邢苗	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	51	507	13.0	20.0
4	汤新	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	4	96	2.0	4.0
5	张煜	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	6	107	4.0	6.0