小鼠胚胎干细胞α-GT基因打靶的研究

• 作者: 应大君 张伟 朱楚洪 糜建红 蹇锐
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 生物学
• 关键词: α-GT 异种移植 基因打靶 小鼠
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 173-176
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 2197字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2005.02.014

摘要

目的在小鼠胚胎干细胞上进行α-1,3半乳糖基转移酶(α-GT)基因打靶.方法利用长距离PCR和套式PCR从C57小鼠基因组DNA中克隆出α-GT基因组DNA片段,构建了针对α-GT基因外显子4的置换型基因打靶载体ploxp-GT,同源长臂(5.0kb),同源短臂(3.97kb),同源序列全长共约9.0kb.将打靶载体酶切线性化并以电穿孔方法转移入小鼠ME ES细胞.结果通过G418和Gancyclovir正负选择出171株ES细胞药物抗性克隆,Southern blot鉴定获得11个α-Gal(+/-)小鼠ES细胞克隆,重组频率为6.4%.结论上述方法能够完成α-GT基因敲除,为进一步完成α-GT基因敲除小鼠奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蹇锐	第三军医大学微生物学教研室	28	183	8.0	12.0