密码子的鸡体偏嗜性优化增强H5亚型禽流感HA基因的表达水平和免疫原性

• 作者: 于康震 姜永萍 张洪波 张芳芳 李呈军 步志高 陈化兰
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 禽流感 H5亚型 密码子优化的HA基因 DNA疫苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 377-381
• 页数: 5页
• 分类号: R511.7
• 字数: 3300字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2005.05.008

摘要

目的用鸡偏嗜性密码子替换H5亚型禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的保护性免疫原HA基因的密码子,优化和构建了基因optiHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果.方法利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的HA基因(optiHA5),并将其插入表达载体pCI构建了DNA疫苗质粒pCIoptiHA5;将pCIoptiHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA5及pCIHA5分别以100 μg和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果间接免疫荧光法和Western-blot分析表明基因optiHA5表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100 μg pCIoptiHA5可形成75%的免疫保护,100 μg pCIHA5可形成50%的免疫保护;10 μg pCIoptiHA5可形成对免疫鸡75%的部分免疫保护,而10 μg pCIHA5则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5.结论试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,提高免疫原性,增强免疫保护效果.