青海血蜱cDNA表达文库的构建

• 作者: 任巧云 党志胜 关贵全 刘志杰 刘爱红 李文卉 殷宏 罗建勋 马米玲 高金亮
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 青海血蜱 cDNA表达文库 构建
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1187-1191
• 页数: 5页
• 分类号: S852.74+6|Q785
• 字数: 3631字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2005.11.017

摘要

在无RNA酶污染的环境下摘取半饱血青海血蜱唾液腺、马氏管和卵巢等器官,从中提取RNA,进而纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头.将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间.用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成青海血蜱的cDNA表达文库.经测定,所构建青海血蜱cDNA文库的库容量约为2×106PFU/mL,重组率为100%,扩增后文库的滴度为8×109PFU/mL.通过对该文库的免疫学筛选,获得一个编码青海血蜱肌球蛋白碱性轻链的全长cDNA序列.所有结果显示,青海血蜱cDNA表达文库已成功构建.