RNAi及DNA芯片分析肝癌细胞系中受DNMT3B调控的下游基因

• 作者: 张建琼 樊红 许军 谢维 赵主江
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 医学
• 关键词: 甲基转移酶 DNA甲基转移酶3B RNA干扰 肝癌
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 人类与医学遗传学
• 页码范围: 1115-1127
• 页数: 13页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文

摘要

为揭示DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)在肝癌中是否参与了肿瘤的发生,应用Western blotting及细胞免疫化学方法分析DNMT3B蛋白在人的正常肝细胞株、肝癌癌旁细胞株及肝癌癌细胞株中的表达.构建了DNMT3B 的RNAi稳定表达的重组载体,并转染入肝癌细胞株SMMC-7721中.以半定量RT-PCR及Western blotting分别鉴定DNMT3B RNAi表达载体对内源性DNMT3B的抑制效率.用高通量的cDNA基因芯片分析了SMMC-7721中DNMT3B抑制后有影响的下游基因谱.结果显示,DNMT3B在肝癌细胞株中的表达水平明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞株.DNMT3B的RNAi稳定表达重组载体转染SMMC-7721细胞株2个月后,观察到DNMT3B明显受到抑制.cDNA基因芯片分析发现,DNMT3B抑制后诱导26条基因表达下调,115条基因表达上调,包括一些发育相关基因以及肿瘤相关基因,如SNCG、NOTCH1、MBD3、WNT11、MAOA、FACL4等.提示DNMT3B的高表达可能与肝癌的发生有关,并以调控其他相关基因的表达而起作用,包括与发育相关的重要基因.