质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响

• 作者: 李恩民 王子良 许丽艳
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 生物学
• 关键词: 嵌套缺失技术 影响因素 NGAL基因
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 79-82
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616X.2005.02.004

摘要

背景与目的:探讨影响嵌套缺失反应的重要因素,找出相应的解决方案.材料与方法:以构建好的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)基因5'端调控区质粒pGLB-G6为研究对象,采用碱裂解法、聚二乙醇纯化法及QIAGEN试剂盒等3种不同方法制备该质粒,分别研究ExoⅢ对它们进行非特异性切割的敏感性,选出对ExoⅢ不敏感的质粒制备方法;在22℃和37℃分别进行缺失反应,琼脂糖凝胶电泳监控,以确定缺失反应是否已经发生;应用PCR技术与限制性内切酶酶切相结合的方法鉴定缺失子.结果:QIAGEN试剂盒制备的质粒对ExoⅢ的非特异性切割最不敏感,可用于进行下一步的缺失反应;在22℃进行缺失反应时,电泳鉴定发现DNA片段的长度没有明显的变短,而在37℃时,同一反应体系的DNA片段长度明显缩短;进一步用限制性内切酶酶切可筛除PCR中的假阳性,获得准确的缺失子.结论:质粒的质量是确保进行特异性缺失反应的关键因素,通过QIAGEN试剂盒制备的质粒质量较好;设立一个37℃缺失对照管可作为判断低温条件下是否发生缺失的标准;PCR技术与限制性内切酶酶切相结合的方法鉴定缺失子,可确保获得特异的缺失子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许丽艳	汕头大学医学院肿瘤病理研究室	76	528	13.0	19.0
2	李恩民	汕头大学医学院生化与分子生物学教研室	77	510	12.0	18.0
3	王子良	汕头大学医学院生化与分子生物学教研室	3	13	2.0	3.0