实时定量RT-PCR检测马动脉炎病毒

• 作者: 朱来华 杨松 梁成珠 王谦滨 蔡梅红 陈溥言 高宏伟
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马动脉炎病毒 实时RT-PCR TaqMan探针 定量检测
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 141-144
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2005.02.010

摘要

选取马动脉炎病毒(EAV)基因组中高度保守的开放阅读框7(ORF7)序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测EAV.使用含有选定检测序列的克隆标准品做标准曲线,证明该方法可以检测出含有5(4.77)个RNA分子,即可从组织培养液(TCF)中检出一般含有5 PFU/μL病毒拷贝.对猪生殖呼吸道综合征病毒、马疱疹病毒无交叉反应,特异性好.用疫苗用种毒(Bucyrus标准株)肌肉注射于马驹后,定量RT-PCR比病毒分离试验更能灵敏地检出呼吸道排出的病毒.对456份临床鼻腔分泌物样品检测,定量RT-PCR检出6份阳性,而病毒分离只检出2份阳性.一步法实时定量RT-PCR检测样品中的EAV,在快捷、准确、方便和高通量方面优于细胞培养病毒分离的检测方法,可以作为检测马病毒性动脉炎(EVA)病毒的快速方法.