差异显示PCR技术在念珠菌基因表达研究中的应用

• 作者: 吕时铭 朱宇宁
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 差异显示PCR技术 念珠菌,白色/遗传学 基因表达 方法学
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 157-162
• 页数: 6页
• 分类号: R379.4
• 字数: 4642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.02.013

摘要

目的:探讨差异显示PCR技术(DD-PCR)在念珠菌基因表达研究中的方法学要点.方法:将临床阴道来源的白色念珠菌氟康唑敏感菌株435体外诱导氟康唑耐药性,于诱导80d得到耐药子代435-2,采用长引物差异扩增、银染显示差异条带、反式点杂交预筛选及非放射性法标记探针的改良的DD-PCR,比较435与435-2在有药及无药培养基中的表达差异.结果:在435-2含药培养组中得到较435-2、435无药培养组表达明显增强的片段N2、N3、N12,分别与数据库中白色念珠菌的醇脱氢酶基因ADH1、拓扑异构酶基因TOP2及多药耐药基因CDR1基因有高度同源性;半定量RT-PCR中证实了ADH1、CDR1基因在耐药株中的高表达.结论:ADH1、CDR1基因的高表达与白色念珠菌氟康唑耐药性形成相关,ADH1可能是新的耐药基因;改良的DD-PCR技术降低了假阳性率的产生,使确证步骤更加便捷,在念珠菌研究领域有很好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱宇宁		1	0	0.0	0.0
2	吕时铭		2	1	1.0	1.0