利用mRNA差别显示技术分离红树植物许树耐盐相关cDNA

• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: mRNA 差别显示 PCR 许树 耐盐
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 34-38
• 页数: 5页
• 分类号: S718.43
• 字数: 3342字
• 语种: 中文

摘要

选用适应甜土种植10余年的红树植物许树分株,在室内分别以盐水与自来水进行沙培.分别提取叶片的总RNA.通过oligo(dT)12CA反转录合成cDNA第1链,以此为模板,用4组10核苷酸随机引物与锚引物o1igo(dT)12CA组成的引物对,进行PCR扩增,选择差异表达片段,发现3个稳定的差异cDNA只存在盐水培养下许树叶片中,而自来水培养条件下却没有.这3个差异cDNA片段分别命名为colb1,colb2,colb3.对3个cDNA采用DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter KitI进行RNA杂交检测,只有colb1在盐培许树叶中呈现稳定的显色信号,在自来水浇灌的许树叶中却无显色信号,colb2和colb3均无显色.可见colbl(463 bp)是耐盐相关cDNA.将片段colb1克隆,并进行序列分析,其AT碱基对占全序列的61.74%.将序列提交NCBI进行BLASTN和BLASTX查询,未发现相关同源cDNA.耐盐相关cDNA的获得将为分离全长耐盐基因和其耐盐机制的研究奠定了基础.