人白细胞介素-1受体拮抗剂或白细胞介素-10逆转录病毒载体的构建与体外实验

• 作者: 唐福林 张宁 韩飞
• 来源期刊: 中华风湿病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素1受体拮抗剂 白细胞介素10 逆转录病毒科 基因治疗
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 68-71,插2-1
• 页数: 5页
• 分类号: R593
• 字数: 4020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1007-7480.2005.02.002

摘要

目的构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)或人白细胞介素-10(hIL-10)基因的重组逆转录病毒(rRV),体外转染兔滑膜成纤维样细胞,检测目的基因的表达水平与持续时间.方法提取人外周血单个核细胞总RNA,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因;酶切、连接目的基因与逆转录病毒载体pLXSN,筛出阳性克隆,经GP2-293细胞包装,收集病毒并鉴定;rRV-hIL-1Ra、rRV-hIL-10分别体外转染兔滑膜成纤维样细胞,RT-PCR测定目的基因mRNA表达水平与时间的关系.免疫组织化学与免疫印迹测定蛋白水平的表达与持续时间.结果成功构建了携带hIL-1Ra或hIL-10基因的重组逆转录病毒,rRV-hIL-1Ra与rRV-hIL-10均能有效转染体外培养的兔滑膜成纤维样细胞,RT-PCR测定目的基因mRNA高峰均出现于转染后第5天左右.免疫组织化学和免疫印迹均检测到hIL-1Ra、hIL-10的表达.经G418筛选后的细胞中,hIL-1Ra的表达在转染后第30天内达高峰,至少持续60d;hIL-10的表达至少持续40 d.结论以重组逆转录病毒为载体可以成功地将hIL-1Ra或hIL-10基因导入体外培养的兔滑膜成纤维样细胞并实现稳定表达.