一种新的PrP无细胞构象转化系统的建立

• 作者: 刘勇 周伟 张宝云 张瑾 李锋 王小凡 董小平 陈岚 韩俊 高建梅
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: PrP 原核表达 生物素标记 无细胞转化
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 264-268
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 字数: 3597字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2005.04.005

摘要

PrP细胞外构象转化系统已经被一些实验室用于朊病毒的研究,但在反应体系中往往需要使用放射性同位素.为了建立一种安全方便的PrP无细胞构象转化系统用于TSE发病机制的研究,通过PCR方法获得仓鼠PrP(HaPrP)全长基因,克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌中表达并纯化出分子量为27kD HaPrP蛋白,Westernblot证实可与PrP特异性单克隆抗体反应.将纯化蛋白在体外标记生物素(Biotin-7-NHS),与纯化的scrapie 263K毒株仓鼠感染脑组织prpsc蛋白共同孵育4天后,经蛋白酶K消化,Western blot检测,证明存在一条抵抗蛋白酶K消化的、被亲和素特异性识别的条带,其分子量约为20kD.这表明HaPrpsen可以被转化为HaPrPres.实验表明,可以利用原核系统取代真核系统表达PrP,并用生物素标记取代35S标记纯化蛋白,建立一个更加安全方便的无细胞构象转化系统,用于朊病毒的研究.