一种新的黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的基因克隆及表达

• 作者: 庄然 张新海 方亮 李林 欧阳为明 蓝天 谢鑫 金伯泉
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MAGE-C2 RT-PCR 载体构建 基因
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 249-252
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 2456字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2005.04.003

摘要

目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的cDNA,构建真核、原核表达载体并转入相应细胞获得表达.方法:采用RT-PCR技术,从直肠癌细胞系SW480的总RNA中克隆了MAGE-C2 cDNA序列,并将开放读框分别插入质粒pEGFP-C1和pGEX-4T-3中,获得pEGFP-MAGE-C2绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体和pGEX-MAGE-C2谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体,将pEGFP-MAGE-C2转染293T细胞,观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的定位;将pGEX-MAGE-C2转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导表达GST融合蛋白,并用谷胱甘肽亲和层析法纯化重组蛋白.结果:获得MAGE-C2开放读框并构建表达载体,测序结果与GenBank收录的序列相一致.真核表达载体转染293T细胞后显示MAGE-C2蛋白定位于细胞核;原核重组蛋白大部分以可溶性形式表达,亲和层析后,获得了较高纯度的MAGE-C2-GST融合蛋白.分析显示原核表达GST融合蛋白的相对分子质量为70 000,使用抗GST单克隆抗体进行Western blot分析证实为目的蛋白.结论:成功的获得MAGE-C2基因,构建了其表达载体并获得表达,为进一步制备MAGE-C2特异性单抗及深入探讨MAGE-C2可能参与肿瘤发生发展的机制提供了重要条件.