丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究

• 作者: 刘妍 崔玉芳 成军 王建军 王志凌 白桂芹 纪冬 郭风劲
• 来源期刊: 肝脏
• 关键词: 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS4B 反式激活 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-26
• 页数: 3页
• 字数: 2722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1704.2005.01.009

摘要

目的应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库,克隆HCV NS4B蛋白反式激活相关基因.方法以HCV NS4B表达质粒pcDNA3.1(-)-NS4B转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交分析.将富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆聚合酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析.结果文库扩增后得到33个阳性克隆,经菌落PCR分析显示其中28个克隆含有大小不等的200～1000 bp插入片段.测序及同源性分析显示,12种已知基因编码蛋白,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因,可能是NS4B反式激活靶基因.结论成功构建了HCV NS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HCV NS4B反式调节的靶基因在肝炎、肝纤维化和肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据.