稳定转染短发夹状RNA后子宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因表达的变化

• 作者: 刘毅智 刘风英 吴宜林 吴秀山 张克强 聂妹芳 陈勇 陶光实
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 宫颈肿瘤 转染 癌基因蛋白质类,病毒性
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 693-696
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-567X.2005.10.014

摘要

目的探讨宫颈癌细胞株HeLa细胞稳定转染表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒后,HeLa细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因(HPV18E6)表达的变化.方法实验组将本实验室前期构建的可遗传性表达HPV18E6 shRNA的pE6-1shRNA质粒和含E6基因突变点的pE6-2shRNA质粒分别转染HeLa细胞,对照组以空质粒pSUPER和不加质粒的脂质体分别转染HeLa细胞.稳定转染后,氨基糖苷抗生素(G418)筛选阳性细胞克隆,RT-PCR技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法分别检测HeLa细胞中HPV18E6 mRNA和蛋白表达的变化.结果稳定转染后,G418筛选,实验组HeLa细胞有新的阳性细胞克隆形成,而对照组HeLa细胞最终全部死亡.实验组转染pE6-1shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6 mRNA表达水平为0.76±0.28,明显低于对照组转染脂质体者(1.14±0.45)和转染pSUPER质粒者(1.12±0.23,P<0.05);HeLa细胞中HPV18E6蛋白阳性表达强度较对照组转染脂质体者弱.实验组转染pE6-2shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6 mRNA和蛋白表达水平分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论稳定转染表达HPV18E6 shRNA的质粒后,宫颈癌细胞中HPV18E6 mRNA和蛋白表达明显受到抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴秀山	湖南师范大学生命科学院	80	274	8.0	14.0
2	陈勇		22	20	2.0	3.0