可溶性AZURIN分子重组子构建对人骨肉瘤U2OS细胞的杀伤和诱导凋亡

• 作者: 叶招明 徐荣臻 李伟栩 杨迪生 苗旭东 陶惠明
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肉瘤/病理学 细胞分裂/药物作用 凋亡 重组,遗传 假单胞菌,铜绿 蛋白质类 细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 384-389
• 页数: 6页
• 分类号: R73-36
• 字数: 4081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.05.002

摘要

目的:研究可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用.方法:用PCR方法由假单胞菌染色体DNA扩增AZURIN基因片段,将其融合插入原核表达载体pQE30中,并在M15大肠杆菌表达可溶性的AZURIN蛋白.该蛋白经纯化和复性后,诱导人骨肉瘤U2OS细胞,通过MTT法、Hoechest 33258荧光染色法及倒置显微镜观察凋亡细胞;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位变化和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡.结果:AZURIN的蛋白纯度达99.1%以上.用50～200 mg/L的蛋白诱导人骨肉瘤U2OS细胞12 h以上细胞的生长和增殖被显著抑制,并且观察到典型的凋亡细胞、凋亡小体、凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化,线粒体跨膜电位随着AZURIN作用的时间和浓度的增加而逐渐降低,对照组和50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN组细胞线粒体跨膜电位分别降低(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).细胞的凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系,作用48 h时凋亡率达峰值(35.8±3.78)%.结论:利用大肠杆菌制备的小分子蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用,线粒体途径可能是AZURIN诱导细胞凋亡的机制之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗旭东		1	3	1.0	1.0
2	叶招明		3	11	3.0	3.0
3	杨迪生		4	25	3.0	4.0
4	徐荣臻		2	4	1.0	2.0
5	李伟栩		2	6	2.0	2.0
6	陶惠明		1	3	1.0	1.0