DNMT1 siRNA 稳定表达载体的构建及其沉默效率的评价

• 作者: 吴守伟 张建琼 樊红 许军 谢维 赵主江
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: RNA干扰 DNMT1基因 DNA甲基化作用 小分子干扰RNA
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 142-145
• 页数: 4页
• 字数: 3327字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2005.02.006

摘要

目的构建能在肝癌细胞系SMMC-7721中稳定表达的高效率 DNMT1的RNA干扰载体.方法合成特异性干扰 DNMT1的小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)分子,并与pSUPER-GFP载体连接.脂质体转染SMMC-7721细胞,并以G418筛选稳定表达细胞系.应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹方法对细胞系中 DNMT1的RNA表达水平和蛋白表达水平进行了分析.应用甲基化聚合酶链反应方法分析该细胞系中甲基化的基因E-钙粘着蛋白的甲基化状态.结果转染 DNMT1沉默载体的SMMC-7721细胞中 DNMT1的mRNA表达量为对照载体pSUPER转染SMMC-7721细胞的43%,而前者中DNMT1蛋白表达水平小于后者的10%. DNMT1的siRNA沉默效率大于90%,所构建的 DNMT1的siRNA有较高的沉默效率. DNMT1的表达抑制使E-钙粘着蛋白基因启动子区出现去甲基化.结论成功构建了能稳定表达的高效率 DNMT1的RNA干扰载体, 但目的基因沉默后其RNA表达水平与蛋白质表达水平表现不一致,评价siRNA干扰作用时应以目的基因相应蛋白质的表达水平为准.