人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达

• 作者: 夏家辉 夏昆 戴和平 梁德生 梁羽 潘乾 胡艺俏 薛志刚 邬玲仟 龙志高
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 杜氏肌营养不良 人源载体 基因治疗 微小肌营养不良蛋白 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 493-496
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 569字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2005.05.004

摘要

目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达.方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达.结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上.结论 pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究.