重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser69,87]的表达、纯化及其稳定性研究

• 作者: 冯辉 吴晓萍 李校堃 苏志坚 郑青 黄亚东
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人碱性成纤维细胞生长因子 突变体 稳定性
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 168-172
• 页数: 5页
• 分类号: Q503
• 字数: 3314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2005.02.016

摘要

目的:对野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)进行突变改造以提高其稳定性.方法:采用PCR突变方法,将hbFGF cDNA第69位和87位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL21(DE3)/pET3c-[Ser69,87]hbFGF,IPTG诱导表达.通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化突变体蛋白[Ser 69,87]hbFGF.MTT法测定重组蛋白的促分裂活性.并对突变体蛋白的抗蛋白酶水解能力、热稳定性及其酸碱稳定性进行了检测.结果:所构建的表达菌株,其[Ser69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白的30%以上.经两步层析纯化,获得了纯度达98%的突变体[Ser69,87]hbFGF.纯化的样品促Balb/c 3T3细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当.突变体[Ser69,87]hbFGF抗胰蛋白酶水解的能力较野生型hbFGF强;热稳定性和酸碱稳定性也较野生型hbFGF高.结论:突变体[Ser69,87]hbFGF的生物学活性与野生型hbFGF相当,其稳定性明显高于野生型hbFGF.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑青	暨南大学医药生物技术研究开发中心	67	505	12.0	19.0
2	吴晓萍	暨南大学医药生物技术研究开发中心	48	316	9.0	15.0
3	李校堃	暨南大学医药生物技术研究开发中心	76	722	14.0	21.0
4	黄亚东	暨南大学医药生物技术研究开发中心	85	740	15.0	23.0
5	苏志坚	暨南大学医药生物技术研究开发中心	51	273	8.0	14.0
6	冯辉	暨南大学医药生物技术研究开发中心	6	26	3.0	5.0