利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数

• 作者: 丁嘉羽 张大兵 张承妹 杨立桃 贾军伟 赵志辉
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 植物,转基因 稻(米) 聚合酶链反应 基因剂量
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 第一届ICMSF-中国国际食品安全会议论文选登
• 页码范围: 140-144
• 页数: 5页
• 分类号: R15|Q343.1|S511
• 字数: 3424字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8456.2005.02.014

摘要

为分析转基因水稻外源基因拷贝数,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析.转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得.定量分析了14株T0代的转基因水稻植株,得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株,同时利用Southern Blot方法进行验证分析.随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株,用Southem Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数,Southem Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southem Blot的分析结果,主要原因是Southern B10t方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段,电泳分析时很难分辨清楚.定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂.两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张承妹	上海市农业科学院生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室	15	217	5.0	14.0
2	杨立桃	上海交通大学生命科学技术学院	19	279	9.0	16.0
4	张大兵	上海交通大学生命科学技术学院	41	425	12.0	20.0
5	贾军伟	上海市农业科学院生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室	2	94	1.0	2.0
8	赵志辉	南京农业大学动物医学院	6	154	5.0	6.0
9	丁嘉羽	上海交通大学生命科学技术学院	1	94	1.0	1.0