含AFP启动子腺病毒载体构建的基础研究

• 作者: 张阳 韩秀敏
• 来源期刊: 大连医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: AFP启动子 E1A 条件复制腺病毒 同源重组 肿瘤
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: R737.33
• 字数: 3188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7295.2005.01.003

摘要

[目的]为提高基因治疗载体的靶向性,在现有的溶瘤性腺病毒基础上,应用细菌内同源重组方法构建含AFP启动子和E1A基因的条件复制性腺病毒载体.[方法]应用限制性内切酶以及体外重组技术获取目的片段AFP-AP-IRES-E1Am并进行重组质粒的筛选;将目的片段插入Pshuttle穿梭质粒中;重组的Pshuttle质粒应用PmeI线性化,与含腺病毒骨架DNA、删除了腺病毒E1、E3区的pAdEasy1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组形成新重组体;抽提重组体DNA,用PacI酶切后,转染至人胚肾细胞株HEk293细胞中进行复制包装,扩增纯化;进行病毒检测.[结果]经用具有Amp抗性及kan抗性的培养板和多种限制性内切酶酶切筛选,证实应用同源重组方法构建了含AFP启动子和目的基因E1A的腺病毒载体;该重组腺病毒可转染HEk293细胞,并进行有效复制.[结论]成功构建了具有特异靶向性的条件复制腺病毒载体,为进一步研究该腺病毒的功能提供了条件.