免疫磁珠法原代分离培养大鼠视网膜微血管周细胞

• 作者: 张晓光 惠延年 王应利 郭斌 陈立军 马吉献
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养 视网膜 周细胞 免疫磁珠
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 498-502
• 页数: 5页
• 分类号: R774
• 字数: 6070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2005.06.005

摘要

目的建立免疫磁珠法原代分离纯化大鼠视网膜微血管周细胞,并确定其免疫组化特征.方法免疫磁珠法结合传统的胶原酶消化及筛网过滤法分离出大鼠视网膜微血管周细胞,采用含有20%胎牛血清的DMEM培养.通过周细胞的形态和生长方式初步鉴别,再进行细胞α-SMA,vWF,GFAP抗体免疫组织化学特征鉴定,及激光共聚焦显微镜行周细胞PDGFR-β和desmin抗体荧光双标观察.周细胞生长曲线通过MTT法测定.结果本法获得的周细胞纯度可达98%,并能连续传代.原代周细胞约2～3周融合,传代后生长和融合速度加快,细胞形态不规则,胞内可见丝状结构,无接触性抑制.免疫组化证实周细胞胞浆内α-SMA蛋白表达阳性,内皮细胞特异性vWF因子表达阴性,胶质细胞特异性GFAP表达阴性.激光共聚焦显示周细胞PDGFR-β和desmin抗原表达均为阳性.结论本研究首次报道应用免疫磁珠法分离培养大鼠视网膜微血管周细胞.获得高度纯化的周细胞具有明确的免疫组化特征,可用于相关视网膜血管性疾病的进一步研究.