肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响

• 作者: 周光炎 尤强 张惠珍 李美星 王树军 王颖 葛海良
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: OVA66 肿瘤相关基因 干扰shRNA 凋亡 增殖
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 450-455
• 页数: 6页
• 分类号: R730.231|Q52
• 字数: 3884字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2005.06.003

摘要

构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响.以RT-PCR、Western blot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱.利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER).利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞.采用Real-time PCR检测目的基因的表达;FACS、Western blot方法分析目的蛋白的表达.MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响.双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实.经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果.并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡.OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王颖	上海交通大学医学院上海市免疫学研究所	126	1374	16.0	35.0
2	周光炎	上海交通大学医学院上海市免疫学研究所	24	165	6.0	12.0
3	葛海良	上海交通大学医学院	30	131	7.0	9.0
4	李美星	上海交通大学医学院上海市免疫学研究所	14	71	6.0	7.0
5	张惠珍	上海交通大学医学院上海市免疫学研究所	5	51	3.0	5.0
6	王树军	上海交通大学医学院上海市免疫学研究所	12	15	3.0	3.0
7	尤强	上海交通大学医学院上海市免疫学研究所	1	7	1.0	1.0