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限制性内切酶结合竞争聚合酶链反应定量检测在多药耐药基因甲基化状态中的应用
限制性内切酶结合竞争聚合酶链反应定量检测在多药耐药基因甲基化状态中的应用
作者:
卜定方
屈晨雪
朱燕
武淑兰
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
DNA甲基化
聚合酶链反应
多药耐药基因
摘要:
目的建立定量检测多药耐药基因(MDR1)甲基化状态的方法.方法在MDR1基因启动子区含甲基化位点的-102~+186 bp片段间设计1条正义引物和2条反义引物,采用不同的反义引物,经3次聚合酶链反应(PCR)获得较目的片段缺失30 bp的竞争内标DNA片段,以Pbluescriptsk+为载体构建竞争内标DNA质粒;待检基因组DNA经甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ消化后与竞争内标DNA竞争扩增MDR1基因; PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析仪扫描,目的片段量等于反应体系中竞争内标量乘以目的片段与竞争内标片段的光密度比值, HpaⅡ酶切与未经酶切标本所得目的片段量的比值为甲基化率.结果倍比稀释的基因组DNA与最佳量竞争内标共扩增MDR1基因启动子区目的片段,两扩增产物量的比值与基因组DNA量呈显著正相关,相关系数r=0.992,P<0.001.结论本方法用于MDR1 基因甲基化定量检测,操作相对简单,定量准确可靠,适用于临床研究中大量样本检测.
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文献信息
篇名
限制性内切酶结合竞争聚合酶链反应定量检测在多药耐药基因甲基化状态中的应用
来源期刊
中华检验医学杂志
学科
医学
关键词
DNA甲基化
聚合酶链反应
多药耐药基因
年,卷(期)
2005,(4)
所属期刊栏目
基础实验诊断研究
研究方向
页码范围
409-411
页数
3页
分类号
R4
字数
2494字
语种
中文
DOI
10.3760/j:issn:1009-9158.2005.04.024
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
武淑兰
北京大学第一医院血液内科
26
189
8.0
13.0
2
屈晨雪
北京大学第一医院检验科
50
223
9.0
12.0
3
朱燕
北京大学第一医院血液内科
30
222
8.0
13.0
传播情况
被引次数趋势
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引文网络
引文网络
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二级参考文献(1)
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二级参考文献(1)
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二级参考文献(2)
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2014(1)
引证文献(1)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
DNA甲基化
聚合酶链反应
多药耐药基因
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华检验医学杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1009-9158
CN:
11-4452/R
开本:
大16开
出版地:
北京市西城区宣武门东河沿街69号
邮发代号:
2-71
创刊时间:
1978
语种:
chi
出版文献量(篇)
7229
总下载数(次)
38
总被引数(次)
76070
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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