马动脉炎病毒主要结构蛋白基因酵母工程菌的构建及鉴定

• 作者: 宋厚辉 张念祖 杜建 王志亮 金宁一
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 马动脉炎病毒 结构蛋白基因 克隆 汉逊酵母菌
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 3-5
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-6005.2005.11.001

摘要

目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础.方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5α E.coli,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中.结果:所有重组质粒经 PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因ORF5、ORF6与酵母重组成功.结论:构建了含有目的基因ORF5、ORF6的重组酵母工程菌,为实现分泌表达目的蛋白 ,进而研制病毒亚单位疫苗及诊断试剂提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志亮		79	832	16.0	24.0
2	金宁一	解放军军需大学病毒基因工程重点实验室	138	903	16.0	21.0
3	宋厚辉	中国科学院微生物研究所	6	14	3.0	3.0
4	张念祖		12	58	5.0	7.0