CD147 shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 侯向华 杨红 辛晓燕 邹伟
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 生物学
• 关键词: 卵巢肿瘤 shRNA 遗传载体 CD147 RT-PCR 印迹法,蛋白质
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 46-50
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 3620字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2005.01.012

摘要

目的针对CD147基因的不同部位,构建不同CD147 shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制CD147的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆.方法用DNA重组技术将针对人CD147基因的不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGE-1中,构建CD147 shRNA表达质粒载体pGE-1 CD147shRNA1、2、3.用阳离子脂质体介导转染人卵巢癌高转移细胞系HO-8910pm,经G418筛选后获得克隆进行鉴定.结果3个CD147 shRNA表达载体pGE-1CD147shRNA1、2、3经PCR、限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确.半定量RT-PCR、Western blotting均证实:转染细胞8910 pm/pGE-1 CD147shRNA,与亲本细胞相比,CD147的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降.结论成功构建了CD147 shRNA表达载体pGE-1 CD147shRNA,并筛选出特异而高效地阻断CD147表达的克隆.此实验结果为进一步研究CD147蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础,并对shRNA设计靶序列的选择有一定指导意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	辛晓燕	第四军医大学西京医院妇产科	297	1601	18.0	24.0
2	邹伟	第四军医大学西京医院妇产科	19	92	5.0	8.0
3	杨红	第四军医大学西京医院妇产科	68	276	9.0	12.0
4	侯向华	第四军医大学西京医院妇产科	6	10	2.0	3.0