Cyclin D1反义寡核苷酸对Tca8113/CDDP细胞基因转录表达的影响

• 作者: 周晓健 张萍 潘红芽 陈万涛
• 来源期刊: 上海口腔医学
• 学科: 医学
• 关键词: 反义寡核苷酸 真核表达载体 细胞周期蛋白D1 细胞系
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 169-172
• 页数: 4页
• 分类号: R739.8
• 字数: 2913字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7248.2005.02.020

摘要

目的:构建细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的反义寡核苷酸真核表达载体,并检测其转染Tca8113/CDDP细胞系后的表达情况.方法:以Tca8113/CDDP细胞总RNA为模板,应用RT-PCR法扩增cyclin D1全长,通过克隆至pUCm-T载体中,测序完全正确;经IPTG诱导,可正确表达蛋白.上下游分别利用Hind Ⅲ和EcoRI的酶切位点插入真核表达载体pcDNA3.1,测序鉴定;并构建表达cyclin D1反义寡核苷酸的2个重组载体,通过Lipofectamine将其导入Tca8113/CDDP细胞系中,G418筛选获得阳性稳定表达细胞系;通过RT-PCR、免疫组化检测cyclin D1基因转录和蛋白表达.结果:成功构建pcDNA3.1-cyclin D1真核表达载体,分别命名为pcDNA 3.1空载体(Co)、cyclin D1mRNA 5'端为靶区的反义载体(C5')cyclin D1 mRNA 3'端为靶区的反义载体(C3')、cyclin D1正义载体(CD1).3'端反义寡核苷酸转染细胞后,cyclin D1 mRNA表达水平降低58.8%,mRNA 5'端反义寡核苷酸组无明显抑制.免疫组化结果显示,转导正义寡核苷酸组cyclin D1阳性表达为最高,转导mRNA3'端、mRNA5'端反义寡核苷酸组为弱阳性表达.结论:cyclin D1 mRNA3'端反义寡核苷酸能明显抑制cyclin D1在Tca8113/CDDP中的表达,为进一步研究逆转Tca8113/CDDP耐药性提供了实验工具.