pIRES2-EGFP/CCK质粒的构建及其在仓鼠体内表达

• 作者: 吕毅 王浩华 白纪刚 禄韶英
• 来源期刊: 肝胆外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胆囊收缩素 骨骼肌 细胞转染 绿色荧光蛋白 COS-7细胞
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 63-65
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3087字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-4761.2005.01.027

摘要

目的胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)在胰腺癌的发生发展中起着很重要得作用,本实验的目的是构建猪源性CCK基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并在哺乳动物细胞COS-7中和仓鼠体内进行表达.方法从含CCK的中介载体pMD18-T/CCK中,以限制性内切酶方法获取目的片段,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,以脂质体法转染COS-7细胞,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,同时采用肌肉注射法免疫仓鼠,了解重组质粒pIRES2-EGFP/CCK的体内表达.结果构建了猪CCK基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,用其转染COS-7细胞后24h、48h、72h均可检测到绿色荧光蛋白的表达,其中72h组荧光强度达到最强.用pIRES2-EGFP/CCK免疫仓鼠后,第4天注射部位可以检测到绿色荧光蛋白的表达,第14天荧光强度明显增强,第42天荧光强度进一步增强,正常对照组始终未检测到绿色荧光蛋白的表达.结论成功构建了猪源性CCK基因真核表达质粒pIRES2-EGFP/CCK,并成功地在哺乳动物细胞COS-7中和仓鼠体内进行了表达,为仓鼠胰腺癌模型的交叉免疫治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕毅		298	1204	15.0	23.0
2	白纪刚		28	134	8.0	10.0
3	王浩华		16	41	4.0	6.0
4	禄韶英		59	385	10.0	17.0