高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库的构建与鉴定

• 来源期刊: 解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经管畸形 高温 cDNA文库 金黄地鼠
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 493-496
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3986字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库.方法:在高温致神经管畸形动物模型上,提取高温致畸金黄地鼠胚胎神经管总RNA,用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒反转录合成cDNA第1链,经LD-PCR合成全长双链cDNA,去除小于500bp的片断后与λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成未扩增cDNA文库,再进行文库扩增.测定未扩增和扩增文库的滴度及重组率;随机挑取噬菌斑,经PCR扩增,电泳检测所构建cDNA文库的质量.结果:未扩增文库滴度为2.03×106pfu/ml,重组率为98.4%,文库扩增后滴度达2.503×109 pfu/ml,重组率为97.6%.插入片段长度分布于500～3000bp之间.结论:成功地构建了高质量的高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库.