AChRα211的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用

• 作者: 李卓玉 袁静明 郝志波 郭晨云
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AChRα211 分泌表达 免疫吸附剂 AChRAb 重症肌无力
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 397-402
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.05.014

摘要

目的在毕赤酵母(P. pastoris)中分泌表达AChRα211,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 方法以质粒pUC-AChRα211为模板,PCR扩增人AChRα211 DNA 片段,插入真核表达载体pPIC9K中.重组质粒转入P. pastoris GS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα211,用Sepharose Q离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化.Western blot 和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr-Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 结果双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα211 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中.重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-AChRα211经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα211,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95%纯AChRα211,并制备成免疫吸附剂.Western blot 和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性.免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb. 结论在P. pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα211,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα211-Sepharose,可清除肌无力患者血清中的AChRAb.