一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立

• 作者: 张驰宇 徐顺高 黄新祥
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光实时定量RT-PCR 相对定量 绝对定量 标准曲线 mRNA定量 斜率
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 883-888
• 页数: 6页
• 分类号: Q781
• 字数: 3743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2005.09.013

摘要

为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2△△△CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张驰宇	江苏大学医学技术学院	21	438	7.0	20.0
2	徐顺高	江苏大学医学技术学院	30	301	5.0	17.0
3	黄新祥	江苏大学医学技术学院	57	333	5.0	17.0