兔眼慢性高眼压模型视网膜损害相关基因的克隆及筛选

• 作者: 冯刚 王秀青 白继 贺翔鸽
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢性高眼压 视网膜神经节细胞 原位杂交 基因文库
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 454-458
• 页数: 5页
• 分类号: R-33
• 字数: 3912字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0412-4081.2005.05.016

摘要

目的构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜组织差异表达基因的消减cDNA文库并鉴定、克隆及筛选与慢性高眼压视网膜损害相关的基因表达片段.方法于兔眼前房注射1%甲基纤维素每周1次,连续5周,制作慢性高眼压模型.提取实验组和对照组兔眼视网膜组织总RNA及纯化mRNA.采用原位杂交技术,进行视网膜组织差异表达基因抑制性消减文库的构建及初步的基因筛选.对一个上调的cDNA片段用地高辛标记,采用原位杂交的方法在实验组和对照组的视网膜中进行相关基因片段的细胞定位.结果成功构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,经基因片段测序及同源性检索,得到有效基因序列16个,经NCBI-BLAST信息途径分析,发现高度同源序列(同源性>98%)2个.其中一个编号F9基因片段与Ras家族基因相似,原位杂交结果确定其大量表达于实验组视网膜神经节细胞及内核层细胞中,而对照组视网膜组织未表达.结论慢性高眼压条件下视网膜组织基因表达失调,F9片段在慢性高眼压视网膜损害过程中表达明显增高.建立慢性高眼压条件下视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,可为今后青光眼视神经损害机制及视神经保护的研究奠定基础.