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血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究
血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究
作者:
刘戈飞
徐晓琳
黄东阳
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
血管
内皮细胞
血管抑制素/拮抗和抑制剂
杆状病毒
基因转染
草地贪夜蛾(Sf9)
昆虫细胞
摘要:
背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生.血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用.为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性.方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Western blot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析:用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTF法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用.结果:成功构建了滴度为2×108 pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53 ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3 μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长.结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用.
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关键词热度
相关文献总数
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文献信息
篇名
血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究
来源期刊
癌症
学科
医学
关键词
血管
内皮细胞
血管抑制素/拮抗和抑制剂
杆状病毒
基因转染
草地贪夜蛾(Sf9)
昆虫细胞
年,卷(期)
2005,(9)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
1096-1101
页数
6页
分类号
R73
字数
4768字
语种
中文
DOI
10.3321/j.issn:1000-467X.2005.09.012
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
黄东阳
汕头大学医学院分子生物学中心
51
423
10.0
19.0
2
刘戈飞
中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室
19
144
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徐晓琳
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2013(2)
引证文献(0)
二级引证文献(2)
2016(1)
引证文献(0)
二级引证文献(1)
研究主题发展历程
节点文献
血管
内皮细胞
血管抑制素/拮抗和抑制剂
杆状病毒
基因转染
草地贪夜蛾(Sf9)
昆虫细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
癌症
主办单位:
中山大学肿瘤防治中心
出版周期:
月刊
ISSN:
1000-467X
CN:
44-1195/R
开本:
大16开
出版地:
广州市东风东路651号
邮发代号:
46-21
创刊时间:
1982
语种:
chi
出版文献量(篇)
4801
总下载数(次)
1
总被引数(次)
58897
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